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19年后,印第安纳·琼斯(哈里森·福特饰)博士再次启程,旨在将埃克托王国遗失的水晶骷髅头骨归还原地——传说中,归还圣物者将被赐予巨大力量。在琼斯的老友奥克斯发现水晶头骨前,这一切还只是传说。可奥克斯之后却不知何故丧失了心智,并落入苏联特工队的手中。为首的冷酷女间谍艾瑞娜(凯特·布兰切特饰)深深着迷于所谓的神秘力量,她胁迫琼斯一行人与其共同前往亚马逊流域,找寻失落的黄金城埃克托王国。在秘鲁密林,琼斯等人和苏军展开酣畅淋漓的战斗,其间还伴随着沼泽、食人蚁、原始土著攻击等致命威胁,在他们历经千难万险,最终踏入密室的那一刻,世界上最奇异的景象出现了……